ECL不显色是什么原因，有指南吗？

具体操作方法：

1. 按常规WB实验步骤孵育一抗，二抗（HRP标记的二抗），洗膜。

2. 最后一次洗膜时可以配制ECL工作液：分别取等体积的A和B混合均匀（吸取A后换吸头再吸取B,以免污染，根据膜的大小配制），工作液配制好后需尽快使用，放置时间长会降低灵敏度。

3. 最后一次洗膜后，用镊子取出膜，用滤纸吸去多余的洗涤液（注意不要接触膜的蛋白面），然后置于洁净保鲜膜上或塑料容器内。

4. 在膜上滴加配制好的ECL工作液，确保工作液均匀覆盖在膜上，避光孵育1-3min。

5. 用滤纸吸掉多余的工作液，随后进行压片检测或化学发光成像检测。

6. 压片：将膜固定于X光胶片暗盒内（蛋白面朝上），暗房内曝光X胶片，显影冲洗。

7. 化学发光成像仪检测：将膜放置到化学发光成像仪内，参考仪器说明进行检测。

注意事项：

1. 配好的工作液暴露于强光下较长时间会降低灵敏度。

2. 长时间曝光会加深背景，使条带强弱趋势不明显，曝光不足条带会比较模糊。

3. 由于该试剂盒极其灵敏，建议按照推荐比例稀释抗体，抗体浓度过高会容易出现背景。

4. 叠氮钠可以抑制HRP，所以不要使用叠氮钠作为防腐剂。

博尔夫官网有大量实验步骤指南，可以参考。对应的试剂盒，染液也可以定。