求助大神，免疫荧光能做出来但WB跑不出来是怎么回事？

如题，构建了一个带Flag标签的质粒，免疫荧光检测到Flag，而且效率还挺高，但是同批转染相同质粒的细胞提取蛋白跑WB就检测不到，测阅读框部分也没什么问题，IF和WB用的是同一支抗体，abclone AE0005，换了293T和Hela等细胞，WB都没有flag特异性条带，求教大神这是什么情况？

PS：测序测过了阅读框部分，没什么问题。WB试验每次都带阳性对照，对照能跑出来。