化学发光免疫测定

chemiluminescence immunoassay (CLIA）

概述

化学发光免疫分析技术 (chemiluminescence immunoassay,CLIA)起步于20世纪80年代初,快速发展于20世纪90年代,成为继荧光免疫技术、放射免疫技术及酶联免疫技术后发展的一项新兴免疫检测技术。化学发光免疫分析技术是利用化学反应释放的自由能激发中间体,使其从激发态回到基态,当中间体从激发态回到基态时释放等能级的光子,再对光子进行测定而进行的定量分析技术。化学发光免疫分析技术主要具有灵敏度高、特异性强、试剂稳定性好且有效期长、检测线性范围宽、操作简单、方法稳定快速、检测项目多、自动化程度高等优点,该技术已成为目前免疫分析技术的主流方法,广泛应用于临床检验的各个领域。

化学发光免疫分析分类

1.化学发光酶免疫测定

化学发光酶免疫测定( CLEIA)是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大,具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶,发光底物为 dioxetane磷酸酯,固相载体为磁性微粒。

2.化学发光免疫测定

化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。

用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件:(1)能参与化学发光反应;(2)与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂;(3)偶联后仍保留高的量子效应和反应动力;(4)应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。

3.微粒子化学发光免疫分析

该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0um这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:(1)竞争反应:用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。(2)双抗体夹心法∶标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。

4.电化学发光免疫测定

电化学发光免疫测定(ECLI)是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应,包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯,可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与 ELISA相似。其基本原理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂,将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌,随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行,不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。

化学发光项目应用

化学发光项目越来越丰富,覆盖肿瘤标志物、甲状腺功能、激素、心肌标志物、糖尿病、传染性疾病、贫血等免疫检测,为更多的临床科室及科研院所提供完整的检测方案,目前罗氏诊断可提供超过90种免疫检测菜单,而国内企业也不断研发和创新,推出新的项目,深圳新产业目前有化学发光注册证103项,迈克生物有40多个项目,目前国内厂家项目既有常规项目,同时也有一些特色项目,如肝纤维化、肿瘤标志物糖类抗原CA50、CA242,自身免疫类等,差异化项目也能够使国产仪器更快进入三甲医院。