轮转+培训笔记 梅毒螺旋体血清学检查与梅毒血清学诊断
一、 梅毒 疾病概要
1. 病因
梅毒螺旋体
2. 发病机制
梅毒螺旋体分泌透明质酸酶促进黏附并降解组织、细胞基质和血管基底膜，引起闭塞性动脉内膜炎，并因免疫反应引起以浆细胞为主的单个核细胞浸润。
3. 基本病理变化
增生性（闭塞性）动脉内膜炎：小动脉内皮细胞及纤维细胞增生，使管壁增厚、血管腔狭窄阻塞
血管周围炎：围管性单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润。
树胶肿（梅毒瘤）：仅见于第三期梅毒，迟发性超敏反应引起梅毒性肉芽肿，质地坚韧而有弹性，似树胶故称树胶肿。镜下观颇似结核结节，不过其中央是凝固性坏死，与结核性肉芽肿相比外层类上皮细胞和朗格汉斯细胞较少，淋巴细胞和浆细胞多，外围有致密的纤维组织，很少钙化。后期树胶肿可被吸收纤维化，最后瘢痕收缩导致器官变形。
肉眼观，皮肤粘膜出现灰白色，质地韧有弹性的肿块。
4. 结局和转归
梅毒螺旋体表面的荚膜样物质可抑制机体免疫应答，导致免疫逃逸，使梅毒病程呈现长期性、潜匿性特点
后天性梅毒病程
第一期梅毒：侵入人体三周左右，引发炎症反应，形成硬性下疳，此期传染性强，但血清学试验常呈阴性（特异性、非特异性抗体产生需要时间）。
第二期梅毒：病原体大量繁殖引起全身淋巴结肿大和广泛性皮肤粘膜损伤即梅毒疹，此期传染性强，血清学试验阳性
第三期梅毒：病变以树胶肿和瘢痕形成为特征，传染性弱，可侵犯全身各脏器，导致器官变形和功能障碍，特别是心血管和中枢神经系统。此期非特异性抗体反应可转为阴性，特异性抗体试验依然阳性。
5. 传染病防治
梅毒患者是唯一的传染源
二、 实验室检查
1. 微生物 基于病因 梅毒螺旋体检查
2. 组织病理检查 详见基本病理变化部分
3. 血清学检查
①Trust甲苯胺红不加热血清实验
a操作步骤：取50ul血清均匀涂布于圆圈内
滴加甲苯胺红溶液一滴
置于振荡器上100r摇8min
取下，打开台灯，光下观察结果
b实验原理：机体感染第六周血清出现反应素（非特异性抗体），反应素可与梅毒螺旋体—心磷脂复合物抗原结合发生肉眼可见的凝集反应
c注意事项
涂布时hold住角度，快速涂布而不出界
规范使用移液器，取样时避免出现气泡，加样时避免血清迸溅
甲苯胺红溶液用前需摇匀。垂直滴加
观察结果时注意把握力度，既要把色素颗粒摇开，又要防止串孔和溢出。
d结果分析
假阳性：
涂布纸片被污染
甲苯胺红溶液用前未摇匀
用时过久，血清蒸发
摇的时间过长（也会导致读取滴度过高）
未及时观察结果
滴加甲苯胺红过多或者吸取血清时有气泡（也会导致做出的滴度过高）
自身免疫疾病、病毒感染、肿瘤等其他疾病干扰（生物学假阳性）
假阴性：检测限有限，滴度很低测不出来。前带效应同样假阴性。 试剂未平衡到室温，假阴性。
未垂直加样 结果不易辨别
e临床意义
梅毒患者规则治疗观察实验。
阳转阴提示血清治愈；阴转阳或滴度升高超过四倍提示血清复发，需调整治疗方案。
若出现血清固定，需做神经系统检查，便于发现早期无症状神经梅毒。
本实验为筛查性试验（VDRL、RPR同），若结果阳性需结合临床表现和其他试验验证。阴性结果亦不能排除梅毒螺旋体感染（一期和三期常检不出来）
②TPPA（TP明胶颗粒凝集实验）
a实验原理
机体感染第六周血清出现特异性抗体，用梅毒特异性抗原（纯化和超声破碎震螺旋体）致敏颗粒与待检血清反应出现肉眼可见的凝集。通过与未致敏颗粒比较判断结果。
b实验步骤
试剂盒和标本移至室温平衡20-30min
致敏颗粒和非致敏颗粒用600UL稀释液复溶，摇床上振荡30min
打开机器和电脑联机软件
检查试剂和枪头是否足量，垃圾是否清理
标号，按号码放标本，放微孔板于恰当位置
软件设置，运行自动加样
（如需手动加样，所有样本和试剂加完后放小旋转机器上轻震一下，或者用手指弹几下均可）
遮光，2h后判读结果
c注意事项
注意阴性、阳性对照和质控品（21miu/ml那个，是所用试剂的检出限）的帽子，避免张冠李戴
如需手工加样，先让试剂均匀滴出，再往待测样品里加，垂直加样。
完成加样后遮光静置，使抗原抗体充分反应
及时判读结果，防止颗粒聚沉使结果出现假阴性
d结果判读
http://www.007swz.com/jxykkj/products/shengwuhuagong_50434.html附说明书链接
e临床意义
证实试验，但阴性结果不排除（抗体产生需要时间，一期时可阴性） 证实实验，但阴性结果同样不能排除
③硒标
a实验原理
看不懂全英说明书，可类比其他方法原理自己脑补
如果用的双抗原夹心法，可以类比检HCG的双抗体夹心法
如果用的第二抗体，可以类比检新冠IgG的方法
b操作步骤
取60ul（其实说明书上写的是50ul，但为了更快地观察结果，可以稍稍多加点）血清滴在加样区，15min后观察结果
c注意事项
在试纸条指定区域加样
加完尽量别动它，别让它倾斜，让血清顺顺当当地往前渗析
抗原抗体结合需要时间，质控线截留需到达一定量才能出现肉眼可见的颜色，别着急，15min后再看结果
还有VDRL、ELISA、CLIA、WB、FIA—ABS等方法，其中VDRL是唯一用于检查脑脊液的，可用于诊断神经梅毒。FIA—ABS以完整螺旋体作抗原 可视为特异性抗体检测的金标准。ELISA、CLIA所用抗原均为重组抗原。
三、 诊断方面
按照要求，把实验做好，结果做准，需能提供有意义的临床参考。
传统血清学检查临床意义
梅毒诊断必须根据病史、临床症状、体格检查和实验室检查结果进行综合分析，慎重做出诊断
