先煮沸还是先加loading buffer

此外，为什么要煮沸呢？有人说煮沸是为了使蛋白酶失活，中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解，有的人说是为了促进SDS与蛋白质的结合，有的又说是为了使二硫键断裂让样品保持一级结构（这个不是loading buffer 中还原剂的作用吗？煮沸是为了促使还原剂的作用发生？？） 到底是怎么样呢？

为什么煮沸前要离心，煮沸后要-20℃保持呢？

医学小白不太懂，可以讲一讲吗？谢谢你。