WB一抗4℃孵育过长？

在科研的路上总会遇上这样或者那样的问题，像WB这样步骤繁多的实验肯定不能幸免。做WB这么久，真的感觉什么样的问题都能遇见。当然也只有每次显影的时候才知道自己跑的有多**，我觉得WB别称应该是“薛定谔的猫”。讲道理，就目前做的这些实验感觉WB相对而言是最不稳定的。

你是否遇见过WB一抗孵育过久的问题？正常情况下，一抗4℃孵育过夜或者常温1h，但是我们可能因为这样或者那样的问题，没有办法及时洗膜孵育上二抗。本人就是这样，由于最近生病在床，近2天没有进食，更不要说去实验室做实验了，但是一直心心念念着自己生病前孵上一抗的条带（毫不夸张的说连做梦都梦见了，呜呜呜~~~），于是今天感觉身体恢复很多了就赶紧跑去实验室想拯救自己泡在一抗3天的条带。

结果证明在4℃孵育3天是可以的，没有杂带，而且条带也很清晰，背景也没有很深。所以以后大家如果因为什么不可抗力没有办法及时洗膜孵育二抗，也不要像我一样过于紧张。不过值得一提的是我调整了一下我使用TBST洗膜的时间以及二抗孵育的时间，平时一抗孵育完之后我都是TBST清洗3次10min，这次我适当延长了洗膜时间改为3次15min；平时二抗孵育1~2h，这次我适当缩短了二抗孵育时间改为40min，我的想法是一抗孵育时间太长了，多洗可以尽可能地洗掉一些抗体非特异性的结合，而缩短二抗孵育时间可以防止背景太深，我也不知道如果不这么调整是否结果会不好，但是至少证明这么做是可以的。最后，希望分享的这些对大家有帮助以及大家有什么关于WB的问题也可以一起交流！