尿液外泌体mRNA逆转录以后跑realtime PCR，内参CT总是30左右？
发布于 2021-04-15 · 浏览 2304 · IP 上海上海
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求助各位前辈：
我最近在做realtime PCR， 样本cDNA是由尿液外泌体mRNA逆转录得来的。
内参选用GAPDH，引物是直接从公司买的。
现在的问题是，我的内参跑出来ct值都是30左右，而目的基因（9个）的ct值都在20-33范围之间，想问下这该怎么办？ 用的是syber green，10ul体系，每个里面样本cDNA加了100ng，师姐说cDNA加到200ng试一试。
在已知外泌体RNA本来提取出来可能浓度就会相对低一些的情况下，如果内参ct值一直是30左右，实验结果还有意义吗？还有什么其他办法能试试吗？
老板说内参的ct值怎么都得降到20以下，师兄师姐都说只要内参、目的基因能跑出来就可以了。
真心求教，谢谢！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2304
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