【求助】厌氧菌培养污染

目前正在培养之前师姐保种的一种厌氧菌，我的操作是在厌氧台里复苏，用一次性接种环取10u菌液到平板上划线分离，厌氧罐培养，分离出单菌落之后挑取单克隆菌落至2ml液体培养基，管底长出薄薄的菌之后传代，直接加入新的培养基在原来的管子里传代，48小时后弃去上清，剩余菌液混匀转移到无菌离心管里继续传代，加入新的培养基，长满底部之后弃去上清，剩余10ml左右菌液混匀，取200ul测序；我是每次一管保种的菌液复苏四个平板，每个平板上挑一些单克隆到液体培养基里复苏，测序的时候每个平板选一个单克隆测序，测序结果是单峰，按理说应该是我的目的菌，但是blast结果完全是另一个属的Cutibacterium acnes或者是Bacterium，列表里完全没有我的目的菌，看结果污染的很彻底，但是污染的话测序结果也应该是双峰，至少得有我的目的菌存在的痕迹呀，直接是污染菌的单峰，想请教一下园里的高人们这是怎么回事呀？有可能污染出来单峰么？（查询了师姐保种前进行测序的结果，师姐保种的细菌应该是没有问题的）