【评测】重组C因子法内毒素检测技术解析

前言：3月22日，湛江安度斯发布公告称，由于受国家政策影响，内毒素检测试剂所用原料鲎（中国鲎及圆尾鲎）被列为 国家二级保护动物（国家林业和草原局、农业农村部2021年2月25日公告（2021年第3号）），意味着内毒素检测试剂原料将受到严格管控，并表示迫于形势，决定 停止供应以下产品：

• 单支凝胶法鲎试剂 (0.1mL) - 灵敏度0.5、0.25、0.125、0.06 EU/mL将于今年 6月30日停产
• 四次装凝胶法鲎试剂 (0.5mL) - 灵敏度0.25、0.125EU/mL将于今年 12月31日停产

文中表示，国内药品、医疗器械放行将面临困境，并建议药企、医疗器械企业尽早选择其他替代测试方法。

目前药典收录方法都是以鲎试剂为基础制定，新方法只能寄希望于药典委尽快出台配套替代方法。

其实寻找鲎试剂（LAL试剂）的替代品，国外一直的没有中断过。

测量和检测居住在纯净水系统中的微生物群落产生的所有内毒素的能力（Burkholderiaceae，Methylobacteriaceae，Comamonadaceae类/科的成员）对于WFI系统的操作控制绝对必要。目前，LAL测试的重组替代品不能始终如一地做到这一点。必须在重组蛋白质化学或重组制剂方面取得进一步进展。对LAL重组替代品的提炼必须考虑对天然环境内毒素的反应性，而不是高度纯化的脂多糖标准品。药典LAL测试与任何重组替代品之间的差异必须科学解决。与1980年代初期采用LAL测试类似。

LAL不是单一酶，LAL不是三种酶，LAL确实包含三种蛋白酶酶原，已知它们与细菌内毒素的顺序激活有关。LAL还包含对β1-3葡聚糖敏感的G因子酶。LAL包含可溶性蛋白质凝结原，可通过活化的凝血酶将其转化为不溶性凝胶。LAL还包含三种丝氨酸蛋白酶抑制剂样蛋白，可调节LAL内毒素和葡聚糖激活级联反应。LAL包含抗LPS因子，可中和细菌内毒素，抗微生物肽，α2-巨球蛋白，大防御素和胱抑素。LAL是鲎450万年原始的免疫系统，和人类鲎将继续作为针对人类和动物注射药物的有效且可靠的安全性测试。我们认识到，人们对大西洋horse的种群可持续性存在担忧。

幸运的是，能够取代鲎试剂的检测方法已经问世。Lonza科学家开发了PyroGene™重组表达的C因子检测方法。C因子是内毒素激活的鲎凝固级联反应中的第一个组成部分，只用于内毒素检测，是进行内毒素释放测试的可靠替代方案。

▲ 上图分别展示了PyroGeneTM重组C因子与传统LAL法，如动态显色法和动态浊度法的激酶级联反应。

Lonza PyroGeneTM重组C因子试剂盒是内毒素检测方法的发展成果。通过体外重组鲎凝血级联反应的第一个组分：C因子，重组C因子法只需一部反应，优于传统LAL法且不依赖动物源成分-鲎血。

PyroGeneTM重组C因子法，激活的C因子直接剪切一个荧光底物，产生的信号被荧光酶标仪识别。由于荧光信号的动态范围大，相较于传统的动态LAL法，PyroGeneTM重组C因子法只需一步反应，检测范围即可达到5.0EU/ml – 0.005 EU/ml。

重组C因子是一种化学合成的试剂，性状更稳定，均一性相对也更好。试剂价格目前和鲎试剂相当，后期如在国内外广泛应用起来，价格会比鲎试剂更具竞争优势。

• 2012年6月，美国食品药品管理局(FDA)发布了“工业热原与内毒素检测的问答指南”文件，将重组C因子法作为LAL法的替代内毒素检测方法*。
• 2015年7月，欧洲药典在新起草的章节5.1.10中将重组C因子法作为LAL和家兔热源测试的替代内毒素检测方法*。
• 2016年7月1日，章节5.1.10正式生效。美国食品药品管理局(FDA)已经允许了510（K）使用PyroGeneTM重组C因子法进行内毒素放行检测的药物临床申请。
• 2018年9月，美国食品药品管理局(FDA)首次批准使用重组C因子法进行细菌内毒素放行检测的药物，一款用于治疗成人偏头痛的单抗药物。
• 2018年12月，欧洲药典起草了重组C因子法细菌内毒素检测的新章节2.6.32。
• 2019年1月，继欧洲药典(EP)、日本药典(JP)和美国药典(USP)之后，第4版本的中国药典将重组C因子法列为细菌内毒素检测方法，并将在2020年生效。

* 参见美国药典(USP)

lonza rFC 产品技术参数：

作为国内比18年的技术供应商，北京泽平科技已于lonza达成合作数年之久，对于lonza C因子法检测拥有专业化、成熟的服务团队。

参考资料：

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