通过人外周血提取PBMC，提取RNA
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本人在读专硕，正在做从外周血提取PBMC，进一步提取RNA，做pcr及qpcr的实验。
实验中提取RNA时遇到的问题如下：
1.提取PBMC的步骤如下：用的索莱宝的试剂，离心后吸取第二层云絮状物质，用PBS洗三遍，离心后沉淀如图一，总是会有一些红红的东西，应该是红细胞，不知道会不会影响后续提RNA的浓度。
2.加入trizol，用普通方法提取RNA，加入氯仿后第二层分层不是很清楚，都是沉积在管壁上，我只敢吸一点点RNA清液，可能只有20ul最后的RNA总是能看到黑色的一点点的杂质，提取后用紫外分光光度计测得的OD260/280总书记小于1.8，最高也只有1.72，每个操作都是很规范的，不知道步骤出在哪一步。
请问有人做过PBMC提取RNA吗？纯度够吗？
已经在实验室泡了一周了，还是没法测出来，求赐教！
最后编辑于 2020-09-21 · 浏览 7336
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