枯草芽孢杆菌转化出问题

有没有做枯草芽孢杆菌表达的老师，有几个问题想请教各位老师

1）请问枯草芽孢杆菌转化后过夜培养一般多久会长出阳性菌落？我试了电转和化学转化法，一般都要在16h之后才会长出一点点，而且菌落是很小的圆点，做菌落PCR鉴定也没有条带，只有一次过夜培养12h不到就长出大一点的圆点，白色的，但是菌落PCR还是没有条带

2）请问枯草芽孢杆菌可以菌落PCR鉴定吗？我是用*头挑取小菌落到10ul水里，95℃加热10分钟，再-20℃放置5分钟，高速离心取1ul做模板。结果都没有条带，请问是不是PCR方法不对

3）请问枯草芽孢杆菌转化最后涂板取多少量，我是1ml复苏体系取100ul涂板，涂完是干净的，但是过夜培养后在平板表面像是长出一层像膜一样粗糙沙沙的东西，这种情况正常吗

谢谢各位老师指点