重组胰蛋白酶细胞消化液的选择及在细胞培养液中的应用

重组胰蛋白酶细胞消化液的选择及在细胞培养液中的应用 

用不同活性的两种细胞消化液消化Hela贴壁细胞，观察消化结果和记录消化时间及转接培养后的生长状态，见表1。

细胞消化液          时间/min           消化完全细胞/%               生长状态

PBS+1kU              7             86           好

PBS+2kU             6              80           好

PBS+5kU              4.5             50           不好

PBS+10kU            3              42          不好

PBS+0.01%EDTA+1kU     3             90           好

PBS+0.01%EDTA+2kU     2             96           好

PBS+0.01%EDTA+5kU     1.8             35         不好

PBS+0.01%EDTA+10kU   1.5             20          不好

 表1 不同细胞消化液的细胞消化时间及消化后和转接培养后的生长状态

  由表1可见，第一组细胞消化液是单独使用RPT 消化贴壁细胞，在PBS+1KU和PBS+2KU组的消化时间很慢（6min以上），且由于时间过长，致使细胞损害，细胞传代后不能正常生长；随着RPT活性增加到5kU和10kU,消化时间缩短，但细胞毒性增加，所以RPT不能单独使用。第二种细胞消化液是RPT和EDTA配合使用，消化时间缩短，消化后和转接培养后细胞状态较好。由于EDTA是化学螯合剂，主要螯合Ca²⁺，Mg²⁺，使细胞分离，细胞毒性小，能帮助RPT消化细胞。根据消化时间，消化后细胞生存能力和转接后生长状态，最终确定活性2KU/ml的PBS+0.01%EDTA细胞消化液最合适，见图1。

图1 细胞消化前后形态

a. Hela细胞消化前的形态；b. Hela细胞消化后的形态正常，细胞分离完全（消化时间：2min）；c.转接培养24h后的生长状态正常。