体外杀伤实验的问题，麻烦各位大咖指导下

想请教各位大咖一个问题，最近我们老板让我们开发In vitro killing assay（效/靶细胞杀伤实验），我也在网上看了很多protocol，因免疫学知识薄弱，有个问题始终不能理解，就是体外 CD8+ T cell/ splenocyte/ NK cell对于target cell的识别问题，具体如下：

1. 从小鼠脾脏提取splenocyte，免疫磁珠分选技术提取纯化的CD8+ T cell, 再使用anti-CD3e/CD28 antibody激活 CD8+ T cell之后，如果此时与小鼠黑色素瘤细胞B16F10共孵育， CD8+ T cell能够去识别杀伤B16F10吗？（换句话说，仅仅给与anti-CD3e/CD28 antibody激活 naive CD8+ T cell，是不是不能诱导分化为CTL?)
2. 如果不分离CD8+ T cells，直接使用splenocyte开展实验，使用anti-CD3e/CD28 antibody，或者是conA/PMA/ion等激活splenocyte，此时与B16F10共孵育， splenocyte能够去识别杀伤B16F10吗？
3. NK cell对于target cell的识别杀伤，如果从人的PBMC分离出NK cell, 与target cell-K562直接孵育，不给予cytokine如IL-15/IL-2等激活NK , NK cell会主动杀伤 K562 cell吗？

这几个问题困扰我很久了，还请各位专业人士能够给与指导，感谢