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大肠杆菌发酵异常(发酵罐)

发布于 2019-11-14 · 浏览 5747 · 来自 Android · IP 浙江浙江
这个帖子发布于 5 年零 186 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

如标题,实验需要大肠杆菌转质粒,从摇床转到发酵罐(50L)实际用35L,然后再低温诱导表达。前几个月做都没有问题,最近几次出现相同的问题(摇床里面能诱导出来,上发酵罐就长不好。摇床用发酵罐1:1配比的培养基也能诱导出来,上发酵罐照样长不好。),排除了好几个原因,还是表达不出来目的蛋白,已经浪费很长时间了,肯求各位大神指点。


具体异常表现:


菌生长缓慢,溶氧总是在上发酵罐后3-5小时下降再回升,8小时后又开始下降,然后在低溶氧(25%-50%)波动。在发酵12小时左右已经能闻到异味了,诱导6小时后跑胶没有目的条带。诱导前PH正常,前期和中后期都没有很多泡沫。没有加很多碱,补料加的2000-3000ml左右。


img



首先我觉得可以排除掉菌种的可能,因为摇床能诱导出来目的蛋白。


然后如果染菌的话,菌会死亡,泡沫增多,也有可能先变浑浊再变清,现在是既没有泡沫,菌也没有变清。


再说糖和磷酸盐,这个验证过了,磷酸盐也测PH,没有问题。


后来我考虑加补料应该早点加,不应该等系统在6h时自动加,可能3小时的时候就缺补料了。然后就2、3、4小时各加一次补料,我在上罐4小时的时候看着还正常,然后5小时后没人看着了,溶氧又上去又下来了。


最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5747

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