外泌体的研究方法

           今天想跟大家聊一聊外泌体，作为外行请允许我在此班门弄斧，现开始现学现卖的表演：

           首先提一个大家都熟悉的细胞实验——细胞转染：脂质体中间包裹一团小RNA或质粒，被细胞吸收后小RNA或质粒被释放到受体细胞中，外泌体就是一个更复杂的细胞转染实验。

           1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

        结构如上图所示：磷质双分子层膜（夹杂一些蛋白）+包裹的蛋白质、RNA分子

         外泌体的作用主要是细胞间通讯，主要有三种方式：

1. 外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而激活靶细胞细胞内的信号通路。

2. 在细胞外基质时，外泌体上的膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从而激活细胞内的信号通路。

3. 外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合，非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。
   

         自从2007年 Valadi等发现，鼠的肥大细胞分泌 的 exosome可以被人的肥大细胞捕获，并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质；且不仅是mRNA，exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性，在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。这一发现使得研究人员对exosome的研究热情激增，截止目前已经通过286项研究发现了41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA。

           从外泌体的结构中，我们还可知外泌体的研究重点是其所包含的RNA和蛋白质。所以关于它的研究方法主要是蛋白质组学和转录组学。如果大家对肠道菌群的研究方法还熟悉的话，这种方法也很好理解的，毕竟组学都是互通的。

          下贴中将卖弄外泌体的一些研究步骤和方法，也欢迎大家提意见！