CIA小鼠模型胶原乳液的制备

以前跟着师姐做，用三通管接两个玻璃注射器，在冰盒上来回推制备胶原乳液，到后面阻力很大，要用很大力推，又怕三通管崩掉，整个过程需要半个多小时，试剂的损耗也比较大。当时师姐做的大鼠，成功率也比较高，但具体数值我不太记得了。

在Chondrex的"Protocol for the Successful Induction of Collegen-Induced Arthritis (CIA) in Mice"一文中写到:"The emulsion quality is critical for inducing arthritis with high incidence and severity.Emulsions can be made using various methods. However, syringe-syringe and sonication methods are not recommended because emulsions prepared by these methods are unstable and do not induce arthritis effectively. In addition, sonication cleaves collagen into fragments which reduces its arthritogenicity."，他们不建议用注射器或者超声法，因为这样制备的胶原不稳定。文中推荐使用均质机，如下图，但我们没得啊，于是我继续使用师姐带我时候的方法，直到某一天没人帮忙我叫来一个没制备过这个试剂的小伙伴～～

小伙伴说：你们这样制备真慢，我都要累死了。

我：可是咱们没得混匀的搅拌机。

小伙伴：反正只是混匀，你咋不用科里的漩涡混匀器。

我：好像有点道理，可是别人没用过啊，文献里也没人提过。

小伙伴：你反正只要把它们混在一起拌阿拌，不试一下怎么知道行不行。

我：不行，这试剂老贵了，我不能随便搞。

然后又是费力的推，期间小伙伴不断怂恿我用漩涡混匀器～最后实在是太费力了，试了一下还是没乳化完全，我被小伙伴说的有点动摇了😂，两个人搬来了漩涡混匀器（3000 rpm，上面提到的文章中也写到用均质机以1000-3000rpm的速度混匀），冰袋，装过佐剂的小玻璃瓶(可以装5ml，刚好那天把佐剂用完了)。我们把乳化未完全的试剂注入小玻璃瓶，一个人拿着玻璃瓶放在混匀器上混合，另一个人拿两个冰袋贴着玻璃瓶，确保处于低温。用漩涡混匀器混了大概五六分钟，取一滴滴在水上，乳液没有扩散，说明乳化完全了。

前几天需要二次免疫了，我又和师妹又大胆的试了一次，将chondrex装胶原的的小玻璃瓶清洗后高温高压灭菌然后烘干，按1:1的比例加入胶原和佐剂，在冰袋的包裹下，用漩涡混匀器混匀，20分钟后，用移液枪吸取50微升，让乳液自然滴在蒸馏水上，惊喜的是乳液没有扩散，摇了摇烧杯，乳液还会自己弹啊弹缩回去。

二次免疫后才三天，还需继续观察小鼠的情况。其实自己对这样的方法还是有点忐忑，按道理胶原乳液制备过程就是混匀的过程，滴一滴乳液在水面上也确实没扩散，说明充分乳化了，整个过程也是在冰袋周围进行。

不知道还有没有人用过同样的方法啊，可以交流一下，让我心里有个底😂

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11月2日二次免疫，11月12日有几只老鼠足爪肿胀（其实中间隔了两天没去看😂，可能12号之前就肿了）。上图～

前爪

(为啥我用数码相机拍出来的这么模糊🤣)

后爪

嗯～用完的chrondex小瓶子不要扔。