PCR弥散带

我做PCR出问题了，一共四个引物，刚开始的时候做的好好的，前一天还好好的，突然一天出现弥201910月6日吧，以为是偶然再做还是一样的弥散，其中一个每次弥散，其他3个是偶尔弥散，又试了几次也是这样弥散，marker没有弥散，

检查了一下程序没有问题，一直都这样，94:5,m，94：30s 58：30s，72°30s 35循环 72：10m，4°--我也调整过道30个循环也一样弥散

难道退火温度会变？做了一个梯度，还是弥撒

然后想可能是试剂出问题了

会不会是酶？用别人的酶做了一次，晕还是做不出来，又把自己的酶给别人做，一切很好，排除了

会不会是水？也是用别人的做，一样还是做不出来

会不会是模板的？记得以前有2个做完实验的引物还放着就拿出来pcr，条带很清楚，而且跑胶的时候也跑了一个DNA一点问题没有，况且新提取的DNA也无法p出来

ps跑其他基因能跑出来1000多bp都行

是不是模板太浓或太稀？稀释50背和多加4u，结果稀释的都做不出来了，4ul的还是老样子弥散l

会不会是引物？就把干粉引物溶解了还有一个以前分装放在-20的也拿出来做，结果还是一样弥散，似乎没有问题

引物浓度有问题？加以前的四分之一，根本没有条带了，加一半弥散，多加也是弥散

是不是做pcr那里有问题呢？换个地方做结果还是弥散

是不是人品有问题？换个人做晕还是弥散

到底是什么问题？看看战友们是否有什么想法？

pcr酶用的是2乘的mix

现在准备在订购引物再试试，引物订购回来了做出来的效果还是一样都是弥散，

会不会是公司的问题，从生工换到秦科还是一样的，

8月1号发生同样的事，解决不了，都换了基因了，又发生同样的情况，跪求原因，