鱼类肠道HE切片，求大佬指点

第一次做组织切片，样品送到学校公共平台做的，拿到切片后不太会看，希望本区大佬们指点一二！

鱼体大小20 g左右，还很小，肠道比较细，取样的时候用锋利的组织剪小心剪下5-8 mm的肠段，4%多聚甲醛固定48 h，15~30~50~70%酒精处理以后，送去平台做石蜡切片和H&E染色。

拿到切片后，感觉多数切片都还是不错的，染色清晰，没有杂质污染，组织结构也比较完整，但是我老板认为切的不好，很多细胞都碎了，绒毛也不完整，觉得可能切片的角度并不好。

对比文献，感觉单个的小肠绒毛细胞确实不如文献中那么清晰、明显，杯状细胞也不太明显，有几的样品有大量的空泡，有的没有，不知是否与不同肠段有关。有的文章里有这样的空泡，说是具有分泌功能的囊泡，有的文章里的图片上并没有这么多的空泡，不太确定是什么。

鉴于我个人没有病理基础，我老板也不那么靠谱，所以提出一些问题，像各位请教！

1. 切片质量如何？切得好不好，染色如何？有的样品偏红，有的偏蓝，是染色的问题吧？（有的样品有裂纹，这个是不是固定不足或切片制作没做好呢？）如果这些切片做得不好，我用包埋好的蜡块自己切片、染色，能否获得更好的切片？（不过我觉得我一个新手不可能做得比平台那些每天做切片的老师做的好啊！）

2. 小肠绒毛形态不完整，是切片质量差导致的，还是样品本身的原因呢？这批样品多数是处理过的，理论上会出现肠绒毛萎缩、肠炎，由于鱼处于快速发育期，所以还可能有绒毛发育不完全的现象。我需要确认观察到的异常是处理导致，还是切片技术导致。一些文章也会将空泡和杯状细胞混淆，图1里面这些应该不是杯状细胞吧？

3. 粘膜固有层与肌肉层之间有明显的黑褐色颗粒，并聚集成不规则块状，我怀疑是色素沉着，我老板说有可能是脂肪……不知各位是否见过类似的物质？

4. 有的片子里有肠道内容物，这个没办法，鱼的肠道又细又薄，很容易被撕裂，我很难清除肠道内容物，不知道大家有没有好办法？之前试过通过注射器用PBS小心吹洗，但那个是用来提RNA的，不知道吹洗对绒毛和上皮会不会有影响。

图1-1号后肠（相当于结肠）-100x

图2-1号后肠（相当于结肠）-100x

图3- 2号样品前肠（相当于小肠的位置）-4x

图4- 2号样品前肠（相当于小肠的位置）-20x放大

图5- 3号样品 前肠，与2号算是平行样品- 4x

图5- 3号样品 前肠- 20x

图6- 4号样品 前肠，有裂纹-4x 

图7- 4号样品 前肠，有裂纹，看不清-20x

图8-5号样品，后肠-4x 

图9- 5号样品，后肠-20x，有非常明显的黑褐色颗粒

图10- 6号样品，后肠，有内容物（食糜），绒毛形态异常-4x

图11- 6号样品，后肠，有内容物（食糜），绒毛形态异常，肌肉层有损坏-20x

图12- 7号样品，处理后期，预计出现炎症和绒毛萎缩-前肠-染色较淡-4x

图13- 7号样品，处理后期，预计出现炎症和绒毛萎缩-前肠-染色较淡-20x

图14- 8号样品，处理后期，预计出现炎症和萎缩，染色较淡，有大量黑褐色颗粒-4x

图15- 8号样品，处理后期，预计出现炎症和萎缩，染色较淡，有大量黑褐色颗粒-20x

图16- 8号样品，处理后期，预计出现炎症和萎缩，染色较淡，有大量黑褐色颗粒-20x

图17-9号，对照，理论上的健康组，后肠-4x

图18-9号，对照，理论上的健康组，后肠-20x

图19-9号，对照，理论上的健康组，后肠-20x