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电泳PCR产物出现多条带

发布于 2019-01-15 · 浏览 8817 · IP 黑龙江黑龙江
这个帖子发布于 6 年零 110 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

    如下图:

    

img

用的3%的胶,两侧是DL500的Marker,1-6是做的普通PCR温度梯度,circ是相同引物做的实时PCR产物,靠右还有个Maker是DL2000。(DL500是TAKARA的,150bp和200bp总是分不开,从上到下依次是50bp,100bp,150bp,200bp,300bp,400bp,500bp)

普通PCR产物除了期望的条带(红色线条圈起来了,180bp左右)之外,还有个杂带(绿色线条圈起来了,看着大概不到750bp),1-6是做的温度梯度,从53度到65度,为啥每个空都有这个杂带???而实时PCR产物(蓝色线条圈起来了)只有期望条带,溶解曲线也是单峰。

两个用的相同的引物,普通PCR的反应体系为:

10乘Buffer          2.5ul

mgcl2                 1.5ul

10mMdNTP       0.5ul

Taq酶                 0.5ul

Primer(5uM) 各0.5ul

cDNA                 1ul

DEPC水              18ul

不知道这个反应体系怎么样,求助各位大神。

最后编辑于 2019-01-15 · 浏览 8817

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