电泳PCR产物出现多条带
如下图:
用的3%的胶,两侧是DL500的Marker,1-6是做的普通PCR温度梯度,circ是相同引物做的实时PCR产物,靠右还有个Maker是DL2000。(DL500是TAKARA的,150bp和200bp总是分不开,从上到下依次是50bp,100bp,150bp,200bp,300bp,400bp,500bp)
普通PCR产物除了期望的条带(红色线条圈起来了,180bp左右)之外,还有个杂带(绿色线条圈起来了,看着大概不到750bp),1-6是做的温度梯度,从53度到65度,为啥每个空都有这个杂带???而实时PCR产物(蓝色线条圈起来了)只有期望条带,溶解曲线也是单峰。
两个用的相同的引物,普通PCR的反应体系为:
10乘Buffer 2.5ul
mgcl2 1.5ul
10mMdNTP 0.5ul
Taq酶 0.5ul
Primer(5uM) 各0.5ul
cDNA 1ul
DEPC水 18ul
不知道这个反应体系怎么样,求助各位大神。
最后编辑于 2019-01-15 · 浏览 8817