为何菌落PCR跑电泳出现阶梯形图像？

大家好！我在做给白色念珠菌某基因贴myc标签的实验。向菌体转入一段长片段后，要用菌落PCR鉴定上下游的完整性。今天上午我鉴定了下游完整性，结果跑琼脂糖凝胶电泳出现这样的图像。我还从来没P出过这样的图像。

最左边是1kb ladder，由下往上依次为：0.5kb 1kb 1.5kb 2kb 3kb。预期片段大小为448bp。

右边呈阶梯状的都是以转化长出的菌为模板P出来的。

PCR的反应体系  ddH2O   38.5μl

                        10×ExTaq Buffer  5μl                  

                       适量菌

三者 100℃ 5 min，冰上5 min。重复两次。

                   dNTP Mix  4μl

                  引物1（10μM）  1μl

                  引物2（10μM） 1μl

                Ex Taq   0.25μl

反应条件                  94℃     5min

                               94℃     30sec

                              54℃    45sec       36cycles

                              72℃    30sec

                               72℃   6min

                             4℃    ∞

其中引物1使用 oligo calculator 计算得Tm值为52℃，引物2是54℃。

请路过的前辈帮忙看一下，为什么会P出这样的条带？不胜感激！