WB求助！跑内参条带总是不齐

已经做了几个月的wb了，之前也没有出现过这种问题。暑假连续做了半个月一张图都没有出，刚开始以为是天气太热，最近控制住实验室温度，还是跑不出来，感觉应该是电泳的问题。测了一次1X电泳液的PH，边摇边测是8.05，静置数值是8.16。给各位老师说一下我们的实验步骤。胶板是前一天晚上治好放在四度冰箱，并且用保鲜膜封好的。上层胶用60V，下层胶用100V，充分冰浴。这是今早显色的结果，真的是不知道哪里出问题了，求老师指教。