求助，miRNA扩增不出来，不知道是引物问题还是别的原因

想做miRNA的qPCR，用一个生物公司的软件，茎环法设计了反转录引物，和PCR上下游引物。

没有买miRNA的试剂盒，用Trizol法提RNA，普通反转录试剂盒，仅是把引物换成了自己合成的引物。

反转录时RNA上样量1ug，PCR扩增，cDNA上样量4ul。然后跑PAGE电泳，胶浓度20%。

内参条带很清晰很亮，三个miRNA仅有一个跑出条带，但条带后面还有一个弱的带，不知道是什么。另外两个miRNA均没能跑出来。

刚开始以为是退火温度不合适，就设置了温度梯度，从51到63℃，六个样品，仪器自动均匀分布温度。结果发现温度对结果并没有影响。

是因为模板量太低了吗，那两个没跑出条带的RNA是miRNA184和miRNA4472。

科研新手，没想到刚开始的一个简单的PCR就把自己给困住了，求助各位大神解答，谢谢谢谢！！！