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腹腔巨噬细胞提取步骤分享

心血管内科医师 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 湖北湖北
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这个帖子发布于 7 年零 44 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

1.配置5%巯基乙酸盐培养基 121摄氏度 灭菌15min 4摄氏度保存备用

2.腹腔注射2ml 5%巯基乙酸盐培养基 2ml(避开肠管和内脏),刺激72小时

3.术前给小鼠禁食8h以上

4.颈椎脱臼法处理小鼠,酒精浸泡3分钟

5.剪开皮肤,充分暴露腹膜

6.用眼科镊提起腹膜,腹腔注射5ml预冷的1640培养基,轻柔小鼠腹部5min,用注射器回抽腹腔灌洗液,收集于15ml离心管中

7.重复第六步两次,将灌洗液4摄氏度 1000rpm 8min 离心弃上清 ,必要时加入红细胞裂解液,直至看见白色的细胞沉淀

8.用含20%FBS1640培养基重悬细胞,于37摄氏度 5%CO2培养箱中培养过夜(为了充分贴壁,延长时间)

9.第二天换液,用预温1640培养基洗涤一遍,加入10%FBS1640培养基重悬细胞


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