腹腔巨噬细胞提取步骤分享
1.配置5%巯基乙酸盐培养基 121摄氏度 灭菌15min 4摄氏度保存备用
2.腹腔注射2ml 5%巯基乙酸盐培养基 2ml(避开肠管和内脏),刺激72小时
3.术前给小鼠禁食8h以上
4.颈椎脱臼法处理小鼠,酒精浸泡3分钟
5.剪开皮肤,充分暴露腹膜
6.用眼科镊提起腹膜,腹腔注射5ml预冷的1640培养基,轻柔小鼠腹部5min,用注射器回抽腹腔灌洗液,收集于15ml离心管中
7.重复第六步两次,将灌洗液4摄氏度 1000rpm 8min 离心弃上清 ,必要时加入红细胞裂解液,直至看见白色的细胞沉淀
8.用含20%FBS1640培养基重悬细胞,于37摄氏度 5%CO2培养箱中培养过夜(为了充分贴壁,延长时间)
9.第二天换液,用预温1640培养基洗涤一遍,加入10%FBS1640培养基重悬细胞