聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)

1.安装灌胶玻璃板
2.制胶及灌胶
1）制胶
     聚胶  2.7ml
     TBE（5×）1ml
     甘油  1ml
     双蒸水5.3ml
      N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）10ul
——将上述混合液上下颠倒混匀。
2)封底：取少量（约0.5ml）上述混合液移入另一试管，加入10%过硫酸铵（Ap）5~10l，快速混匀后注入两块玻璃板间，在底部形成一较窄的胶带。静置直至胶凝固为止。
3)灌胶：取80~130l 10%过硫酸铵加入上述剩余混合液中，快速混匀，灌入两块玻璃板之间，插入大小合适的梳子静置直至胶凝固为止。
4)小心移去梳子，用双蒸水冲洗加样孔，将加样孔内的碎胶甩净。
5)将胶固定于电泳槽内，加入0.5×TBE缓冲液。
3．电泳
1）加样：标本10ul＋blue/orange 6×Loading Dye 5l，混匀后加入一孔。有一孔加入Marker DL2000 5l；
2）电泳：接通电源，选择150V。电泳至标准参照染料迁移到所需位置（约1小时），切断电源。
3）剥胶：在双蒸水中轻轻剥离。

Notes:
5×Tris-硼酸（TBE）的配制：
Tris碱  54g
硼酸  27.5g
EDTA(PH8.0)，0.5mol/L，20ml。