单抗类似药细胞株筛选分享

今天跟大家分享一个折腾我快两年的单抗类似药细胞株筛选的过程。记得半年多前还像战友请教之前遇到问题，然后记得问题解决后要和大家分享一下结果。

之前遇到的问题是我们要做一个单抗类似药的细胞株，专利大概在2020过期。原研药是个孤儿药但每年超过10亿刀销售，这个单抗有点特别是IgG2/4杂合的Fc抗体，而且是用 NS0 细胞细胞表达的。我们最初根据专利原研药的DNA序列和自己的CHOK1筛选平台筛选细胞株，反复做了N次都没有拿到细胞株。遇到的问题是筛选到细胞株只有轻链表达，没有重链表达。

或许有人问序列对不对等问题，首先排除序列问题，我们在筛选之前做了瞬转并拿到些蛋白确认没问题才做的。后来和同时商量更换重链的SP看看能不能解决问题，后来还是不行。

接着找到关于这个单抗一个专利提到用CHOK1细胞表达体系，并提到了与最初的NS0细胞系表达体系的比较。发现用CHOK1宿主细胞是要改了其中部分氨基酸序列的，但我们要做类似药就不能改氨基酸序列。最后再次和同时讨论SP和氨基酸序列不变而改变密码子，可能是原研中使用了某些适合于NS0细胞表达的密码子却不适用CHO细胞。

后来又花了半年不到时间，最近筛选到细胞株了。目前还在孔板里培养过程中，预计表达量在2g左右。后来再返回去看之前专利，里面说道换成CHO细胞表达量和蛋白修饰会有很大改善，也就是说原研用NS0细胞表达量太低了，可能还有修饰问题~

总之，这个抗体蛋白感觉有很大的不一样，终于在年底之前搞定了，对自己也算有个交待了。最后等克隆产量出来了再更新~~