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【求助】TRIzol提rna,加异丙醇后变黄

血液病版版主 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 辽宁辽宁
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这个帖子发布于 11 年零 199 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
用takara的TRIzol,1000ul,加200ul氯仿混匀后离心,出现澄清的水样层,大概500ul左右,取400ul上清,加600ul异丙醇混匀,是澄清的,放置3分钟后,液体开始变黄,按要求放置10分钟,已经很黄了,离心后沉淀是黄色的,而且底部有大概10ul左右的油滴状液体,无色透明,黄色沉淀沉积在油滴上界面上。
看了网上一些讨论,大概猜测如下:
1、加氯仿后混匀不充分,可能和油滴相关
2、取上清体积与异丙醇体积不是任意的,(说明书上说是0.5~1倍,我加了大概1.5倍)导致了变黄,主要原因可能在于ph值的变化,那个上清里面有微量酚或碘,异丙醇偏碱,异丙醇量加多了,溶液ph值明显上升,形成酚或碘化合物沉淀。


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