DiR标记外泌体！！！

我是苏州大学15级临床医学研究生，最近在做荧光标记exosome做小鼠体内活体成像实验，但是配置的DiR母液（2mg/ml）荧光强度都不及老鼠本底荧光强度，后续实验完全无法进行，下面是我的实验步骤， 希望大家能帮我纠正指导一下，非常感谢!

DiR染料标记exosome

1.      储存液（母液）配置：10mgDiR中加入5ml DMSO,浓度2mg/ml；

2.      提取的exosome溶于200ul PBS中，将DiR储存液加入到exosome溶液中，调制工作浓度为15uM，室温孵育30min；

3.      10mlPBS 洗涤，超速离心10000g，2hr去除未结合的染料和exosome;

4.      200ul PBS重悬。

  这是在活体成像仪下拍的染料液滴荧光，本图右下角是2mg/ml的储备液滴，仅有这个液滴有均匀的荧光分布，但强度不够。其余是与exosome混匀后的工作液滴，浓度不一样，但是只有上下两级有荧光。     

  老鼠的本底荧光很强，右侧EP管里面是exosome与15uM DiR工作液混合孵育后的液体，但是仅有液体上层漂浮了一层荧光，且荧光强度还没有老鼠本底荧光强。     

我不清楚是哪一部分出了问题，希望田老师您能不吝赐教，指导我做一下这个实验，真的非常感谢！

期待您的来信，祝新年身体健康，诸事随顺！