ELISA自己包被抗原测小鼠血清抗体，为什么抗原空白对照组OD值很高？
发布于 2017-02-06 · 浏览 1.7 万 · IP 江苏江苏
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一 实验步骤：
1 .用CB稀释的抗原（1.25，1，0.5，0.25，0ug/ml）, 每孔100 μl，4℃过夜包被于96孔板中。第二天用含有0.05%吐温-20的PBS洗涤5遍。
2. 封闭液为含1%BSA的0.05%PBST, 每孔200μl，37℃封闭1h，封闭后含0.05%吐温-20的PBS洗涤5遍。
3. 加含1%BSA的0.05%PBST稀释的小鼠血清, 每孔100 μl，37℃孵育2h。含0.05%吐温-20的PBS洗5遍。
4 加1%BSA的0.05%PBST稀释的HRP标记的山羊抗鼠的二抗（10000倍稀释），每孔100 μl，37℃避光孵育1h。
5 含0.05%吐温-20的PBS洗5次，加入TMB,100μl/孔，25℃避光孵育20min,每孔加50 μl终止液（1M硫酸）。450nm测量吸收值。
由上数据可以看出，血清稀释度为1000倍，包被抗原浓度为0.5较好，但是最后一列抗原空白对照组的OD值却很高，请大神帮忙分析原因！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.7 万
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