鉴定非二硫键引起的多聚体结合形式

最近在做一个重组蛋白，其有两条不同链 ，通过分子间作用力结合在一起，形成单体，分子量约80KD。 单体有活性。

表达纯化后做了一些检测。 

1、SDS-page ：

160Kd处出现一条带(二聚体的位置)

80Kd处 出现两条带（Mark处有串道，可更清晰看到），提示单体及降解产物， 

20Kd处为单条链

DTT还原后 无显著变化，二聚体条带仍可见.， 所有样品均为加热，加热易破坏分子间作用力。

2、Native page

非还原，仅一条带，位置为160Kd处，

DTT还原后反而多了聚体及单体，原条带仍存在，提示此条带不能被DTT还原。 

3、SEC

与Native page 类似，纯度高，分子量约160Kd.

综上，推测表达的蛋白为二聚，但不能被DTT还原，意味着非二硫键引起（本身序列中未配对巯基少）。 

SDS-PAGE因为变性，破坏了结构，使其部分降解（此推测还需要WB去验证）

   也尝试先DTT还原后，去跑SEC 验证是否为二硫键影响，但没做出好的结果 。 加热后去SEC，反而有多聚 产生。

  也看到过有些聚体是通过分子间作用力，但如何鉴定呢？

那么问题来了

1、此蛋白是否天然是二聚体？

2、如何再去鉴定此二聚体非二硫键引起？

3、怎么有效鉴定 二聚为分子间作用力  引起？

 多谢 多谢