请问我用PHA刺激人PBMCs做CCK8实验为什么刺激不出来？
这个帖子发布于 9 年零 71 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
1、第一次预实粉剂验，用的PHA是新配的（用带酚红的RPMI1640+10%胎牛血清培养基配的），用的带酚红的RPMI1640+10%胎牛血清，PHA浓度25ug/ml,培养6小时成功，加CCK8两小时后，刺激组OD值提高40%。三小时后OD值下降。
2、第二次预实验，使用的是上次剩下的PHA，在6度左右冰箱放置了14天，实验失败，刺激组OD值没有变化。
3、考虑是否是PHA失效了，再次实验，用上次配置后-20度冷冻的PHA，其他条件相同，CCK8两小时，刺激组OD值提高15-20%。
4、因为有的说明书说酚红对CCK8结果可能有影响，购买无色的RPMI1640（不含L-谷氨酰胺和酚红），另外购买L-谷氨酰胺加入无色的RPMI1640，+10%胎牛血清配置成培养液，PHA浓度12.5 ，25 ，50 ，75ug/ml,培养6小时成功，加CCK8 2，3，4小时后，刺激组OD值没有提高（4份不同人的标本都是没有变化，甚至还下降了一点）。
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