【求助】有谁染过冰冻切片CD86和CD206的免疫荧光
发布于 2015-08-25 · 浏览 1.5 万 · IP 天津天津
这个帖子发布于 9 年零 268 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做荧光已经半年了 主要是坐骨神经冰冻切片的免疫荧光，但巨噬细胞一直染的不理想。用的是CD68，DC86标记M1，CD68、CD206标记M2。CD206用的Santa的，其他两个用的是abcam的。CD68能染出来，M2双染曾经染出来过，现在单染CD86或CD206都无法染出。
组织取材说明：麻醉大鼠，取脾取血后取双侧坐骨神经，置于4%多聚甲醛4℃过夜，15%、30%蔗糖梯度脱水后，OCT液氮包埋。切片8μm，放于-20保存备用。
染色过程举例说明：37度烘箱30分钟，以防脱片（或室温复温）——取4度储存的丙酮，常温固定组织10分钟——冰PBS洗，5分钟×3次——3%BSA 37度封闭半小时或1小时——一抗4度过夜——复温半小时——冰PBS洗，5分钟×5次——二抗，室温1小时——冰PBS洗，5分钟×5次——DAPI染核封片。二抗质量没问题。
求高手指导！
组织取材说明：麻醉大鼠，取脾取血后取双侧坐骨神经，置于4%多聚甲醛4℃过夜，15%、30%蔗糖梯度脱水后，OCT液氮包埋。切片8μm，放于-20保存备用。
染色过程举例说明：37度烘箱30分钟，以防脱片（或室温复温）——取4度储存的丙酮，常温固定组织10分钟——冰PBS洗，5分钟×3次——3%BSA 37度封闭半小时或1小时——一抗4度过夜——复温半小时——冰PBS洗，5分钟×5次——二抗，室温1小时——冰PBS洗，5分钟×5次——DAPI染核封片。二抗质量没问题。
求高手指导！
最后编辑于 2015-08-25 · 浏览 1.5 万
21 38 点赞
