【求助】用透射电镜TEM观察脂质体形态不规则，可能的原因是什么？

先说下我的空白脂质体配方及制备过程，卵磷脂：胆固醇=30:1，旋蒸30min后PBS普通超声水化，再挤压过0.1um聚碳酸酯膜15次，置于4°冰箱中保存。
用马尔文粒径测定仪测得平均粒径在140 nm，PDI为0.1几，Intensity单峰比较均一，存放10天测size基本无变化；但是用TEM（2%醋酸铀+吸附1~2min，自然放干）拍摄（a）存放10天后 以及（b）刚做好的脂质体形态如下：

（a）30000x

（a）98000x

（b）30000x

（b）98000x
我自己考虑可能存在的因素有：
（1）制备过程中未经探头超声粉碎，直接挤压过膜导致脂质体膜破碎？形态不均一？
（2）配方中胆固醇含量较低，致使脂质体双分子膜不稳定，我看大多外文文献用的磷脂：胆固醇=55:45（也有1：1等）相近的比例。
（3）TEM制样过程负染对脂质体样品破坏？TEM高真空环境导致脂质体破裂？……不太清楚。
非常感谢大家帮我审阅下，希望跟大家探讨并请教具体可能的原因，谢谢！