【求助】tunel荧光染色背景高 promega试剂盒
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我用ccl4造了小鼠肝损伤模型，石蜡切片，promega的试剂盒，TUNEL检测细胞凋亡情况
发现在普通荧光显微镜下，发现绿色荧光集中在胞质中，属于背景，和DAPI重叠，在核中基本看不到绿色信号。
疑问：
1.背景高的原因是什么？我现在想到的是proteinase K处理的时间过短，或酶的working buffer 不对。我是按照protocol上配制的stock buf，使用时用ddH2O稀释成20mg/ml，室温处理了8min。
2.第一次做TUNEL检测，该怎么解读图图呢。
下面六张图是用平台上的confocl拍的：
前三张为一组，胞质是绿色，但核中没有，按理ccl4处理后会出现凋亡
后三张为阳性对照，虽然核中信号明显，但背景也非常高。
发现在普通荧光显微镜下，发现绿色荧光集中在胞质中，属于背景，和DAPI重叠，在核中基本看不到绿色信号。
疑问：
1.背景高的原因是什么？我现在想到的是proteinase K处理的时间过短，或酶的working buffer 不对。我是按照protocol上配制的stock buf，使用时用ddH2O稀释成20mg/ml，室温处理了8min。
2.第一次做TUNEL检测，该怎么解读图图呢。
下面六张图是用平台上的confocl拍的：
前三张为一组，胞质是绿色，但核中没有，按理ccl4处理后会出现凋亡
后三张为阳性对照，虽然核中信号明显，但背景也非常高。
