【原创】树突状细胞（DC）培养中的几个问题
发布于 2015-03-21 · 浏览 3.2 万 · IP 浙江浙江
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科研无止尽、yj1984ren 2人推荐最近还是有不少网友对DC培养有许多问题，结合我自己经历谈点体会。
在我们的体会中，对DC培养影响最大的莫过于细胞因子了，特别是GM-CSF的活性。我们在DC培养中，其实是在细胞因子的作用下，诱导DC的前体细胞逐步向DC方向分化和增殖，一个或数个DC前体细胞在GM-CSF的诱导下逐渐分化、增殖成为DC集落的过程。因此，DC培养的一个显著特征是曾集落生长，如果在培养中没有集落，那么DC是肯定培养不好的，正如楼主的照片所示。粒巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）顾名思义是刺激集落形成的，GM-CSF的活性也是以集落形成的多寡和大小来衡量。我们的DC培养的过程以及和丁香园战友的交流中，发现不同公司甚至不同批次的GM-CSF的活性有天壤之别。比如：R&D的rmGM-CSF活性相当稳定，一般10ng/ml的工作浓度就足够了，但由于价格因素，我们后来自己重组表达了rmGM-CSF，活性也可和R&D的媲美；而peprotech的GM-CSF活性就不敢恭维了。批次好时20ng/ml能培养出DC，而批次不好时50ng/ml、100ng/ml才能勉强培养出DC，有的甚至完全培养不出DC。我个人碰到的培养失败者，80％以上是因为GM-CSF的活性不好造成，更换成我们的或R&D的GM-CSF基本都在第一个周期就培养成功。附图中是部分网友用我们的GM-CSF和peprotech的GM-CSF培养DC的对照照片。
根据文献报道，因DC的前体细胞的不同，IL-4在DC培养中的作用也有时不同。在骨髓来源的DC（小鼠DC），rmIL-4主要是抑制骨髓细胞向巨噬细胞方向分化，如果培养中不加rmIL-4，那么在培养板的基底层的巨噬细胞就会多一些，但不影响DC收集的纯度和DC功能；而在单个核细胞来源的DC（人类DC）培养中，IL-4的作用是不可或缺的，不加rhIL-4,尽管不影响DC的诱导，但会对DC的功能成熟产生巨大影响。
关于细胞因子，还有个种属问题也是至关重要的。GM-CSF和其他细胞因子不同，是有严格的种属特异性的。小鼠的对人类细胞无作用，反过来，人类的GM-CSF对小鼠也无活性，甚至小鼠的GM-CSF对大鼠也无作用，而大鼠的对小鼠仅有部分活性，这无论在众多文献中还是在细胞因子说明书中都是十分明确的，我自己也做过试验证实。甚至同样是小鼠GM-CSF对不同品系的小鼠作用也不一样，我们的无数次培养实验表明，用C57小鼠培养DC明显比Balb/c容易，即用C57小鼠培养，细胞集落明显比Balb/c密集和硕大。这也反过来说明细胞因子在DC培养中的作用和重要性。我曾经在国内刊物中看到有人用人类GM-CSF培养小鼠DC，而且连续发了4、5篇文章，我觉得匪夷所思，不过在他的文章没有看到一个真正的树突状形态的细胞。因此，建议在看文献时还是以国外文献为主。同时，也建议贝福尔摩斯不要尝试用人类GM-CSF培养小鼠DC。
另一个影响DC培养的因素当然是培养方法。我们的体会是在取细胞时（即小鼠培养时取骨髓细胞和去除悬浮细胞是过程、在单个和细胞培养时是分离细胞时），尽可能多地保留DC前体细胞，否则，也很难形成集落。除此，我们并不觉得有什么特殊法宝。
peprotech
我们自己重组的GM-CSF
在我们的体会中，对DC培养影响最大的莫过于细胞因子了，特别是GM-CSF的活性。我们在DC培养中，其实是在细胞因子的作用下，诱导DC的前体细胞逐步向DC方向分化和增殖，一个或数个DC前体细胞在GM-CSF的诱导下逐渐分化、增殖成为DC集落的过程。因此，DC培养的一个显著特征是曾集落生长，如果在培养中没有集落，那么DC是肯定培养不好的，正如楼主的照片所示。粒巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）顾名思义是刺激集落形成的，GM-CSF的活性也是以集落形成的多寡和大小来衡量。我们的DC培养的过程以及和丁香园战友的交流中，发现不同公司甚至不同批次的GM-CSF的活性有天壤之别。比如：R&D的rmGM-CSF活性相当稳定，一般10ng/ml的工作浓度就足够了，但由于价格因素，我们后来自己重组表达了rmGM-CSF，活性也可和R&D的媲美；而peprotech的GM-CSF活性就不敢恭维了。批次好时20ng/ml能培养出DC，而批次不好时50ng/ml、100ng/ml才能勉强培养出DC，有的甚至完全培养不出DC。我个人碰到的培养失败者，80％以上是因为GM-CSF的活性不好造成，更换成我们的或R&D的GM-CSF基本都在第一个周期就培养成功。附图中是部分网友用我们的GM-CSF和peprotech的GM-CSF培养DC的对照照片。
根据文献报道，因DC的前体细胞的不同，IL-4在DC培养中的作用也有时不同。在骨髓来源的DC（小鼠DC），rmIL-4主要是抑制骨髓细胞向巨噬细胞方向分化，如果培养中不加rmIL-4，那么在培养板的基底层的巨噬细胞就会多一些，但不影响DC收集的纯度和DC功能；而在单个核细胞来源的DC（人类DC）培养中，IL-4的作用是不可或缺的，不加rhIL-4,尽管不影响DC的诱导，但会对DC的功能成熟产生巨大影响。
关于细胞因子，还有个种属问题也是至关重要的。GM-CSF和其他细胞因子不同，是有严格的种属特异性的。小鼠的对人类细胞无作用，反过来，人类的GM-CSF对小鼠也无活性，甚至小鼠的GM-CSF对大鼠也无作用，而大鼠的对小鼠仅有部分活性，这无论在众多文献中还是在细胞因子说明书中都是十分明确的，我自己也做过试验证实。甚至同样是小鼠GM-CSF对不同品系的小鼠作用也不一样，我们的无数次培养实验表明，用C57小鼠培养DC明显比Balb/c容易，即用C57小鼠培养，细胞集落明显比Balb/c密集和硕大。这也反过来说明细胞因子在DC培养中的作用和重要性。我曾经在国内刊物中看到有人用人类GM-CSF培养小鼠DC，而且连续发了4、5篇文章，我觉得匪夷所思，不过在他的文章没有看到一个真正的树突状形态的细胞。因此，建议在看文献时还是以国外文献为主。同时，也建议贝福尔摩斯不要尝试用人类GM-CSF培养小鼠DC。
另一个影响DC培养的因素当然是培养方法。我们的体会是在取细胞时（即小鼠培养时取骨髓细胞和去除悬浮细胞是过程、在单个和细胞培养时是分离细胞时），尽可能多地保留DC前体细胞，否则，也很难形成集落。除此，我们并不觉得有什么特殊法宝。
peprotech
我们自己重组的GM-CSF
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3.2 万
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