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【求助】求问普通测序高GC重复序列导致测序失败,PCR如何优化?

最后编辑于 2022-10-09 · IP 浙江浙江
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这个帖子发布于 10 年零 131 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位大神好,小女子用cDNA为模板两次PCR测基因突变。这会做的引物、PCR体系、步骤都和往常一样,为了保证克隆测序的质量,多加了一步纯化步骤,出来的条带也是很亮的,拿到公司测序,那边表示含有高GC重复序列测序失败,双向都失败了,建议克隆测序。
我想请教一下这可能跟哪些因素有关的,我这边PCR需要怎么改进?因为和往常的步骤基本一样,所以觉得奇怪,会不会是我引物和酶放得太久的原因?
请帮忙分析分析,感激不尽。!!
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