【原创】ORF扩增不出来
这个帖子发布于 10 年零 196 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位大神，求助：
最近刚刚通过RACE技术克隆获得了基因的cDNA全长，然后在ORF两端设计了特异引物，进行ORF扩增。两条引物都是21 bp，加上酶切位点之后共27 bp，引物的3‘端分别为C和G；两条引物不算酶切位点的碱基Tm分别为58℃和59℃，目前已经尝试过温度梯度，更换模板，Touchdown，就是没有扩增出目的条带，想请教各位大神该如何是好？以前扩增ORF的时候一次性出带，不过那时候共981 bp，这次片段大小为1410 bp，跟长度有关系吗？
最近刚刚通过RACE技术克隆获得了基因的cDNA全长，然后在ORF两端设计了特异引物，进行ORF扩增。两条引物都是21 bp，加上酶切位点之后共27 bp，引物的3‘端分别为C和G；两条引物不算酶切位点的碱基Tm分别为58℃和59℃，目前已经尝试过温度梯度，更换模板，Touchdown，就是没有扩增出目的条带，想请教各位大神该如何是好？以前扩增ORF的时候一次性出带，不过那时候共981 bp，这次片段大小为1410 bp，跟长度有关系吗？
