亚硝酸盐含量的检测——盐酸萘乙胺比色法

关键词：微粒标准物质 环保标准物质 无烟煤标样 中药对照品
1．实验原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与N-1萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，在538nm处有最大的吸收通过测定其吸光度与标准比较定量。
2．仪器、试剂
(1)仪器小型绞肉机；分光光度计。
(2)试剂
①亚铁氰化钾溶液称取106．0g亚铁氰化钾［K4Fe(cN)6·H2O]，用水溶解，并稀释至1000ml。
②乙酸锌溶液 称取220.0g乙酸锌［Zn（CH3COO）2·2H2O],加30ml冰乙酸溶于水，并稀释至1000mL。
③饱和硼砂溶液 称取5．0g硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)，溶于100mL热水中，冷却后备用。
④对氨基苯磺酸溶液(4g／L)称取0．4g对氨基苯磺酸，溶于100mL 20％盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。
⑤盐酸萘乙二胺溶液(2g／L)称取0．2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中，混匀后，置于棕色瓶中，避光保存。
⑥亚硝酸钠标准溶液准确称取0．1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移人500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，}昆匀。此溶液每毫升相当于200μg亚硝酸钠。
⑦亚硝酸钠标准使用液 临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5．00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5．0μg亚硝酸钠。
3．操作步骤
(1)样品处理取火腿肠可食部分经绞碎混匀后，称取5.0g样品，置于50mL烧杯中，加12．5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀。以70℃左右的水约300mL将试样全部洗入500mL量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。然后一面转动，一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀。再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋A质。加水至刻度，摇匀，放置30min。除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。
(2)测定 吸40mL上述滤液于50mL带塞比色管中，另吸取0.00mL、0.20mL、
0．40mL、0．60mL、0．80mL、1．00mL、1．50mL、2．00mL、2．50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、7．5μg、10μg、12．5μg亚硝酸钠)，分别置于50mL带塞比色管中，于标准管与试样管中分别加入2mL 4g／L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3~5min后各加入lmL 2g／L盐酸萘乙二胺溶液。加水至刻度，混匀，静置15min。用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂卒白试验。
4．结果表示及计算
计算
X=（A×1000）/[m×（V2/V1）×1000]
式中 X——样品中亚硝酸盐的含量，mg／kg；
m——样品质量，g；
A——测定用样液中亚硝酸盐的质量，“g；
V1——样液总体积，mL；
V2——测定用样液体积，mL。
计算结果保留两位有效数字。
精密度：在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值，不得超过算术平均值的10％。
判断：依据和参照食品添加剂标准GB 2760—1996、GB 2762—2005，食品中亚硝酸盐的限量卫生标准为(以亚硝酸钠计)西式蒸煮、烟熏火腿及罐头≤70mg／kg，其他肉类罐头≤50mg／kg，肉制品、火腿肠≤30mg／kg，香肠(腊肠)香肚、酱腌菜≤20mg／kg。
5．注意事项
①本方法最低检出限为lmg／kg。
②本实验用水为重蒸馏水，以减少误差。
③N一1一萘基乙二胺有致癌作用，使用时应注意安全。