【讨论】关于空白溶剂的重现性以及流动相预先混合和在线混合不同方式对基线的影响

最近一个实验深受空白基线的困扰。
USP方法，使用USP相同色谱柱
波长254nm
流动相A:0.01%TEA in water
流动相B:0.01%TEA in ACN
梯度：80%A(0min）——32%A（12min）
空白溶剂：A/B=80/20
杂质吡啶三唑酮出峰时间为0.4min，正好在溶剂峰处。换用长柱子，初始90%A等度5分钟溶剂峰也会随着杂质吡啶三唑酮延后，勉强能分开。
考虑是否可以消除溶剂峰（因为觉得理论上用初始梯度的流动相比例做溶剂不该出现溶剂峰），做了几个测试：
1、为排除TEA质量的影响，流动相中不加三乙胺，进三针空白water：ACN=80:20，用梯度条件运行，结果如下图，很诡异的第一针黑色基线很好，第二三针绿色和蓝色基线恢复以前的模样，一分钟内出现高底溶剂峰，不知道为什么。
2、进1中的空白，等度water：ACN=80:20运行5分钟，在线混合，也是1分钟内出现上述高低溶剂峰。预先手动混合，溶剂峰奇迹般消失- -不知道是仪器问题还是因为在线混合就是会出现这样的高低溶剂峰。在两台Waters液相上测试都是这样。
另外，4.5min、7min、8min的峰是不是系统残留？正常只有水和ACN的流动相和空白溶剂运行梯度的时候会出现这样的峰么？ACN用的Merck的，水的话屈臣氏的蒸馏水和自己制备的超纯水都试过，没什么差异。
不知道实验该如何做下去了，HELP!!!