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【求助】RT-PCR熔解曲线怎么分析?求帮助

风湿科医师 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 江苏江苏
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这个帖子发布于 11 年零 151 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人菜鸟一枚,刚接触PCR,只是按师兄师姐告诉的操作跑了RT-PCR。但是不知道结果怎么分析。
有以下几个问题:
1.我们用的软件分别是stepone。图如下,熔解曲线怎么分析?Tm=88.73,这个Tm与引物的Tm有什么区别?还有这个溶解曲线的意义是什么?
2.右边标本栏里,出现的黄色三角形1,2是什么意思?
3.看网上说,退货温度要比引物Tm值低4-5度,但我们跑根据takara的RT-pcr说明书设置的退货延伸温度统一为60度,而有的引物Tm值才50度左右
4.2的-ΔΔCT法,对照组一定要等于1吗?如果做出结果对照组的离散程度比较大,2的-δδCT远大于1怎么办?结果还能用吗?
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