【求助】关于目的基因的构建
最近在和一个技术员学习通过shRNA干扰的慢病毒转染技术。
技术员构建目的基因的方法是:将需要插入到质粒载体中的目的基因分成四段送到公司合成,每段有30-40碱基。四段组合在一起,刚好可以形成一个双链的带有目的基因及酶切位点的回文结构。
而,将这四个片段组合在一起的方法是:将四段引物以等量混合于EP管内,加灭菌水至50ul。将EP管置于100度沸水中水浴10分钟,然后关掉电源,让水及EP管自然冷却至室温。
我想请教的问题是:
1、这种方法是否可行?因为我并未在文献上找到相关实验方法。
2、如果可行,其原理是什么?只是单纯的解链、退火吗?
3、此种方法的效率如何?