【求助】内参调齐了曝完光用TBST又多洗了几遍内参就不齐了 怎么回事

最近western老出怪事 第一次曝光内参很齐 但是膜有点黑，所以又拿回来TBST洗了多次，然后又去曝光，发现内参酒不齐了。有的泳道几乎没有内参了！！！！怎么回事？？？难道是TBST洗掉了蛋白？？听实验室一个同学说TBST变酸或者变碱会洗掉蛋白，于是我们测了我们用的TBST的PH值，都是7.4附近。
求大家帮忙分析。。。困扰死了，这western简直没法做了！！！！！！！！！！！！