【求助】养了4个多月的内皮祖细胞(epc),越来越迷惑,请兄弟姐妹们帮忙看看!
培养基:lonza EGM-2MV +10%FBS。
消化条件:PBS 洗两遍,0.05% 胰酶+0.02%EDTA, 37摄氏度, 消化2-3min。
1.最开始从骨髓里面取出单个核细胞进行直接贴壁时仅有极少数的圆形细胞贴壁。
2.从第7天左右开始出现一些梭形的伪足很长的细胞。
3.一直每3天左右换一次液,到后来就出现了一些细胞集落,感觉和成纤维细胞有点像,但是又不像,感觉有2种形态的细胞混合在一起。见下图epc p0 day18,epc p0 day19.
4.P0的细胞也做过LDL,UEA双标,也能标上。
5.到第19 天传代后又发现有放射状的集落形成,见下图epc p1 day2/4/6.



想请各位养过大鼠骨髓来源EPC的朋友们帮忙看看我养的到底是不是EPC!这边还有几个问题希望大家能够不吝赐教。
1.到底我养的是不是EPC,是早期EPC还是晚期EPC?
2.为什么day18,19的时候会有2种形态的细胞存在,如果是杂细胞,怎么改进培养方法?
3.为什么day18、19的时候看上去像是铺路石样结构的晚期EPC,传代之后却变成了放射状的细胞集落了?看到过有帖子说放射状集落是原代细胞的特征,这种论断正确么?
4.p0细胞我做过LDL、UEA双标,也能标上,但是流式检测没做过,双标阳性的可信度怎么样?
5.感觉我的细胞不太好制成单细胞悬液,胰酶加进去之后细胞伪足很快消失并且很快就浮起来了,但是怎么吹都吹不成单细胞悬液,有很多消化下来的细胞还是贴在一起,有什么好的方法可以改进?