【求助】巢式PCR阴性对照总是出现

各位好，本人是一名新手，最近一直在做一个巢式PCR扩增大概421bp的片段，结果尝试了很多次，每次都是第一组阴性对照没有条带，当把第一组的阴性对照加入到第二组中，第二次PCR后阴性对照就会有条带P出。
已经尝试了很多次，所有的试剂都怀疑过污染，从酶（dNTP, Tap Buffer），到引物重新合成，以及无菌去离子水也重新购买和灭菌后，结构还是出现了第二组PCR的阴性对照，真的是非常郁闷啊。
我现在是研二，正是实验的开展重要阶段，总是出现阴性条带，老师对我也非常失望，我已经都不知道怎么办了？是不是产生引物二聚体后扩增出现的片段呢？不过阴性对照也是421bp，是怎么回事？现在PCR我已经在通风厨里面坐过了，结果还是出现了阴性，实在没有办法了。
希望各位高手能够给学生提供些帮助，谢谢！
我扩增的是梨形虫18SrRNA，两对巢式PCR引物分别是：
1.BD5 AATTACCCAATCCTGACACAGG
BD8 TTTGGCAGTAGT TCGTCTTTAACA 第一轮540bp
2.BD6 GACACAGGG AGGTAGTGACAAGA
BD7 CCCAACTGCTCCTATTAACCATTAC 第二轮421bp