【求助】大质粒转化效率问题
大家好,最近提到一个18KB左右的质粒,想将其转化至感受态细胞中,但是转化了很多次都失败了,不知道是什么原因。我是将感受态和质粒混合后冰浴30min,42℃热击90s,立刻冰浴5min,然后加入800微升培养基后,放置于37℃摇菌一个半小时,4000离心4min,弃掉600再铺板。总是没有阳性克隆,不知道是什么原因,是质粒太大,效率太低嘛?
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3155
大家好,最近提到一个18KB左右的质粒,想将其转化至感受态细胞中,但是转化了很多次都失败了,不知道是什么原因。我是将感受态和质粒混合后冰浴30min,42℃热击90s,立刻冰浴5min,然后加入800微升培养基后,放置于37℃摇菌一个半小时,4000离心4min,弃掉600再铺板。总是没有阳性克隆,不知道是什么原因,是质粒太大,效率太低嘛?
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