【求助】共聚焦显微镜检测细胞内的ROS
这个帖子发布于 12 年零 83 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做细胞的ROS检测想看一下ROS在细胞内的分布，我买的是碧云天的试剂盒，说明书说是荧光类似于FITC，但我查文献时发现，大部分是488nm蓝光激发，检测525nm绿光，而我在普通荧光显微镜下看到的结果和在共聚焦显微镜下看到的结果不一样，是不是没有装载上还是激发波长不对？共聚焦的是473nm
另外我的操作步骤是不是有问题？
步骤:
取对数生长期的细胞，均以4×10E5/ml的密度接种于含有玻片的6孔培养板上；
2、培养过夜后，用相应药物处理细胞；
3、PBS缓冲液清洗两次，加荧光探针CM-H2DCFDA至终浓度10 uM（无血清培养基稀释） ，37℃孵育30分钟
4、PBS缓冲液清洗三次，随后用防止荧光淬灭的甘油封片；
5、共聚焦拍照。
另外我的操作步骤是不是有问题？
步骤:
取对数生长期的细胞，均以4×10E5/ml的密度接种于含有玻片的6孔培养板上；
2、培养过夜后，用相应药物处理细胞；
3、PBS缓冲液清洗两次，加荧光探针CM-H2DCFDA至终浓度10 uM（无血清培养基稀释） ，37℃孵育30分钟
4、PBS缓冲液清洗三次，随后用防止荧光淬灭的甘油封片；
5、共聚焦拍照。
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