【求助】**：ki67流式染色protocol

请各位大侠急救。想用ki67做淋巴细胞增殖检测，但做了好几次结果都不理想，主要是ki67流式染色（按说明书推荐用染foxp3的固定破膜剂，已经将破膜时间延长到1小时）候加刺激剂和不加刺激剂的结果一样只有峰右移，没有双峰出现（按blank管的阴性峰射门，结果都有90%左右），问了相关的人说是非特异性染色。在这请各位高人指点，望不吝赐教，大家用的什么固定破膜剂，有protocol最好。万分感谢！