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【求助】不加抗原包被的板子,3%BSA的PBST封闭,怎么会有显色呢?

最后编辑于 2022-10-09 · IP 北京北京
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这个帖子发布于 12 年零 295 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
因为没有成品的试剂盒,我是自己包被的酶标板,抗原包被后,用含3%BSA的PBST封闭,37℃半小时。
我发现,我用未包被抗原的酶标板,含3%BSA的PBST封闭半小时,加入1抗孵育1小时,洗板,加入2抗体半小时,洗板,显色,终止------未加抗原组,其OD值非常高,在血清1:5稀释时,可达1.3,1:10稀释时达0.78。
为什么会这样???是我封闭的方法不够吗????

我发现酶标板包被抗原浓度为1ug/ml、0.1ug/ml及0.01ug/ml时,正常人的血清(不应有待检抗体)在5倍、10倍、20倍、40倍、80倍稀释时都能显色,且上述三个不同抗原浓度下,OD值基本没变化;(5倍稀释时,上述三个抗原浓度下,OD值均为0.8左右)----猜想显色是血清中的非特异性抗体吸附酶标板,为证实这一猜测:1、将封闭时间由半小时延迟为1小时;2、将未包被抗原的酶标板,同样的条件下封闭
结果显示,封闭时间延长一倍后,正常人血清测得的OD值没有明显变化,仍然很高;且未包被抗原的酶标抗OD也非常高,甚至高于包被抗原的孔。




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