【求助】膜蛋白在293T细胞中的表达

各位战友好，最近碰到一个棘手的问题。手头有一个膜蛋白（预测有七个跨膜区，GPCR蛋白）想在293T细胞中表达做些功能，却发现怎么也表达不出来。先后换过三个载体（均为CMV promoter，分别是带FLAG，MYC标签和无标签。），做western无论是用FLAG，MYC和该蛋白本身抗体均检测不到表达（转染的质粒量试过1ug和2ug，取样时间试过24小时和48小时）。

可以确定的是，该蛋白没有突变，测序结果杠杠的；转染技术和抗体没有问题，与此同时还用同样的载体做了其他几个可溶性蛋白表达，都很happy；蛋白提取方法也没有问题，试过各种lysis buffer，甚至是直接加loading buffer裂解细胞；其中有一个载体是IRES EGFP，很明显看到GFP在细胞中的表达，证明在转录水平表达是成功的。

问题是，我还没有在293T细胞中表达过膜蛋白，不知道有什么值得注意的地方，望各位战友指导，谢谢。