【求助】关于外周血单核细胞诱导成成熟的树突状细胞的若干问题

本人最近需要培养人外周血PBMC诱导的DC，在几次预实验中遇到一些问题，向各位高手们请教一下，请大家给点宝贵的经验：
1、我通过单核细胞贴壁法来选出PBMC，用的是AXIS-SHIELD公司的FICOLL分离液，按照说明书操作后发现吸取的白膜里所含的血小板太多，而从美国回来的师兄称他们的实验室在这一步之前是先将全血进行2500转离心10分钟弃上层血浆，但是做完后血小板依然很多。
2、筛选出的PBMC后培养24小时后，单核细胞已贴壁，但此时我们应该怎么洗培养板，我用的是六孔培养板？
3、我在随后的实验中未发现像文献上所说的那样，逐渐有悬浮细胞形成，只能观察到细胞开始变形，有突状形成，当培养到第5天时，加入LPS刺激三天并没有发现贴壁的细胞悬浮，而是大部分仍然贴在板上面？不知道是不是因为这些细胞是巨噬细胞而不是DC？
4、我用的细胞因子IL-4为100U/ML GM-CSF为200/ML，LPS为200NG/ML，这些剂量都是从前人打听过来的，不知道是否合理？
请园里的各位达人，曾经做过这方面实验的高手们赐教，谢谢！