【求助】引物合成引物有两个Tm值，如何确定PCR的退火温度？
这个帖子发布于 14 年零 37 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
新手最近PCR。引物是参考BLOOD合成，引物合成有两个Tm值，如64.07度（0.05M Na+）；73.08度（1M Na+），如何据此确定退火温度？另外，我的上游引物GC含量达71%（因为觉得BLOOD是权威杂志，之前未认真计算），不知有没有PCR成功的可能性？出了神马问题？敬请高手指点。（5个基因光退火温度摸了快两个月，还没结果，着急啊）
有木有，有木有！！！！？？？
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